Endoftalmitis endógena / The Endogenous endophthalmitis

La endoftalmitis endógena es una enfermedad ocular infrecuente pero grave. Su manejo ha de ser necesariamente multidisciplinario por la complejidad de la afección sistémica, dirigido a erradicar el foco infeccioso primario, conocido o no, así como a preservar la función visual. Se presenta a un paciente masculino diabético de 66 años, ingresado en un hospital general para tratamiento quirúrgico de úlcera séptica del pie derecho, quien debutó con endoftalmitis endógena anterior difusa por Staphylococcus aureus confirmado mediante cultivos de humor acuoso y sangre. Aunque inicialmente se pensó en uveítis anterior aguda, la presencia de foco séptico en partes blandas y el empeoramiento del cuadro clínico oftalmológico fueron los elementos que condujeron al diagnóstico de la endoftalmitis endógena. La actuación conjunta de varias especialidades médicas hizo posible el manejo satisfactorio del paciente(AU)

Endogenous endophthalmitis is a rare but serious pathology. A multidisciplinary care team should lead the treatment because of the complexity of the systemic affection, in order to eradicate the primary infectious focus, either known or not, and to preserve the visual function. This a 66 years old male diabetic patient who was admitted to a general hospital with the purpose of practicing surgery of the right foot septic ulcer, who began suffering diffuse anterior endogenous endophthalmitis caused by Staphylococcus aureus, and confirmed through aqueous humor and blood cultures. Although the initial diagnosis was acute anterior uveitis, the presence of a septic focus in the soft tissue and the worsening of clinical ophthalmological symptoms led to finally diagnose him with endogenous endophthalmitis. The joint performance of several medical specialists made the satisfactory management of this patient possible(AU)

Papel da insulina na vigência da peritonite decorrente da infecção por Staphylococcus aureus em animais diabéticos e sadios / Insulin role in peritonitis presence due to Staphylococcus aureus infection in diabetic and healthy animals

A nefropatia diabética é uma doença crônica caracterizada por falência renal, que torna necessária a hemodiálise. A diálise peritoneal é uma alternativa para a hemodiálise, porém causa peritonite e morte, principalmente devido à infecção com Staphylococcus aureus, especialmente em pacientes imunodeprimidos, como pacientes diabéticos. Nossa hipótese é que a insulina possa modular a peritonite causada por S. aureus. Para tanto, investigamos sua intervenção, após a indução de diabetes mellitus, na infecção peritoneal por cepas diferentes de S. aureus, analisando os mecanismos moleculares (produção/liberação de citocinas, expressão de moléculas de adesão) e a atividade microbicida dos macrófagos peritoneais envolvidos. Ratos Wistar, machos, diabéticos (aloxana, 42 mg/kg, i.v., 10 dias) e respectivos controles (salina, i.v.) foram submetidos à injeção intraperitoneal de uma suspensão de S. aureus (5x109 CFU/mL) ou volume equivalente de PBS estéril. Os animais foram submetidos a dois tratamentos com insulina NPH: 1) dose única (1UI e 4UI respectivamente, controle e diabético), administrada por via subcutânea; ou, 2) com 4 doses sendo a primeira administrada 2 horas antes da infecção, seguida de metade desta dose às 17 horas e no mesmo horário pelos próximos 2 dias (dose inicial 4UI e 1UI, grupo diabético e grupo controle, respectivamente), passadas 16 horas da última dose de insulina, a glicemia foi determinada e, em seguida, foi realizada eutanásia e coleta de amostras. Avaliamos: a) número de células no lavado peritoneal (LPe), leucograma e glicemia (monitor de glicose); b) níveis séricos de corticosterona e insulina (ELISA); c) concentrações de citocinas (IL-1ß, TNF-α, IL-6, IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-12) e quimiocinas (CINC-1, CINC-2, CINC-3) no sobrenadante do LPe (ELISA); d) expressão de moléculas de adesão (P-selectina, PECAM-1, ICAM-1) no endotélio vascular (imunoistoquímica); e) atividade microbicida. Após a infecção com a cepa ATCC 25923, comparados aos não infectados, ratos diabéticos apresentaram aumento no número de leucócitos (350%) e nas concentrações de CINC-1 (1900%), IL-1ß (1300%), IFN-γ (280%), IL-4 (800%). O tratamento destes animais com dose única de insulina diminuiu as concentrações de CINC-1 (17%) e IFN-γ (30%) e o leucócitos (55%); e aumentou a concentração de IL-4 (260%); enquanto o tratamento com 4 doses diminuiu o número de leucócitos (82%) e as concentrações de CINC-1 (96%) e CINC-2 (45%); e, aumentou as concentrações de TNF-α (270%), IFN-γ (220%), IL-1ß (42%), IL-6 (760%) e a expressão de ICAM-1 (1360%); enquanto as concentrações de CINC-3, IL-10 e IL-12 não foram alteradas pelos tratamentos com insulina. Após a infecção com a cepa N315 HLA+, comparados aos não infectados, ratos diabéticos apresentaram aumento do número de leucócitos (200%), nas concentrações de CINC-1 (1000%), IL-4 (860%), IFN-γ (200%) e na expressão de PECAM-1 (800%) e diminuição de CINC-2 (92%). O tratamento destes animais com dose única de insulina diminuiu a concentração de CINC-1 (85%); e aumentou a concentração de CINC-2 (2030%), IL-1ß (370%) e IL-4 (250%); enquanto o tratamento com 4 doses diminuiu a concentração de CINC-1 (92%); e, aumentou número de leucócitos (66%), as concentrações de CINC-2 (100%), IL-1ß (490%), IL-6 (1870%) e IFN-γ (330%), e os outros parâmetros não foram modificados pelos diferentes tratamentos com insulina. Estes dados sugerem que a insulina possa modular a peritonite induzida por cepas diferentes de S. aureus, controlando pelo menos em parte, o infiltrado inflamatório, a produção das citocinas CINC-1, CINC-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF-α e IL-1ß; e, consequentemente a expressão P-selectina e PECAM-1 no endotélio vascular do mesentério

Diabetic nephropathy is a chronic disease characterized by kidney failure, so hemodialysis is necessary. Peritoneal dialysis is an alternative to hemodialysis, but causes peritonitis and death primarily due to infection by Staphylococcus aureus, especially in immunocompromised patients, such as diabetics. Our hypothesis is that insulin can modulate peritonitis caused by S. aureus, therefore, we investigated its action, after diabetes induction, in peritoneal infection with different S. aureus strains, analyzing the molecular mechanisms (cytokines production/release, adhesion molecules expression) and the microbicidal activity of peritoneal macrophages involved. Wistar male diabetic (alloxan, 42 mg/kg, iv, 10 days) and their respective controls (saline,iv) were subjected to intraperitoneal injection of S. aureus suspension (5x109CFU/mL) or an equivalent volume of PBS sterile. Animals were submitted to two treatments with NPH insulin administered subcutaneously : single dose (1IU and 4IU respectively , control and diabetic) 8 hours prior to euthanasia ; or 4 doses : first dose 2 hours before infection (4IU and 1IU , diabetic and control group, respectively), then half this dose of 17 pm and in the same time for the next 2 days, after 16 hours of the last dose, blood glucose was determined, and then it was carried out euthanasia and sampling. We evaluated: a) number of cells in peritoneal wash (PW), white blood cell count and blood sugar (glucose monitor) ; b) serum insulin and corticosterone (ELISA); c) concentrations of cytokines (IL-1ß, TNF-α, IL-6, IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-12) and chemokines (CINC -1, CINC-2, CINC-3 ) in supernatant of the SBA assay (ELISA); d) expression of adhesion molecules (P- selectin, ICAM-1, PECAM-1) in vascular endothelium ( immunohistochemistry); e) microbicidal activity. After infection with ATCC 25923 strain, compared to uninfected, diabetic rats showed an increase in leukocytes number (350%) and in concentrations of CINC-1 (1900%), IL-1ß (1300%), IFN-γ (280%), IL-4 (800%). Treatment of these animals with a single dose of insulin decreased concentrations of CINC-1 (17%) and IFN-γ (30%) and leukocytes number (55%); and increased IL-4 concentrations (260%); while treatment with 4 doses decreased leukocytes number (82%) and concentrations of CINC-1 (96%) and CINC-2 (45%); and increased concentrations of TNF-α (270%), IFN-γ (220%), IL-1ß (42%), IL-6 (760%) and expression of ICAM-1 (1360%); while the concentrations of CINC-3, IL-10 and IL-12 were not affected by treatments with insulin. After infection with N315 HLA+ strain, compared to uninfected, diabetic rats showed an increase in leukocytes (200%), concentrations of CINC-1 (1000%), IL-4 (860%), IFN-γ (200%) and in the expression of PECAM-1 (800%); and CINC-2 decrease (92%). Treatment of these animals with a single dose of insulin decreased the concentration of CINC-1 (85%); and increased concentrations of CINC-2 (2030%), IL-1ß (370%) and IL-4 (250%); while treatment with 4 doses decreased the concentration of CINC-1 (92%); and increased leukocytes number (66%), concentrations of CINC-2 (100%), IL-1ß (490%), IL-6 (1870%) and IFN-γ (330%), and other parameters were not modified by treatments with insulin. These results suggest that both S. aureus strains activate differently the innate response during peritonitis, and insulin was not always able to modulate this response

Etiologia e perfil de sensibilidade de bactérias isoladas de ovelhas com mastite na região nordeste do estado do Pará / Etiology and antimicrobial susceptibilities of bacteria isolated from sheep with mastitis in northeastern Pará, Brazil

Objetivou-se com este trabalho estudar a etiologia da mastite em ovelhas na região nordeste do Pará, além de estabelecer o perfil de sensibilidade das bactérias isoladas frente a antimicrobianos. Foram examinadas 176 ovelhas da raça Santa Inês, em lactação, mantidas em sistema semi-intensivo, pertencentes a sete propriedades especializadas na criação de ovinos. Foi realizado o exame clínico da glândula mamária, o exame macroscópico da secreção láctea por meio do Teste da Caneca Telada, o California Mastitis Test (CMT), o exame microbiológico do leite e o antibiograma. Das 352 metades mamárias estudadas (176 ovelhas), 21 (5,97 por cento) apresentaram mastite clínica, 26 (7,39 por cento) apresentaram mastite subclínica e 305 (86,64 por cento) metades mamárias foram negativas. A maioria dos animais acometidos pela mastite estava no terço médio da lactação, com menor número de crias e maior número de lactações. Na mastite clínica (MC) as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (42,9 por cento); Staphylococcus aureus (9,52 por cento); Streptococcus spp. (4,76 por cento) e Escherichia coli (4,76 por cento). As associações observadas foram Staphylococcus aureus e Streptococcus spp. (4,76 por cento); Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica, Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo pigmento não hemolítica (4,76 por cento). Já na mastite subclínica (MSC), as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (26,9 por cento); Staphylococcus aureus (15,4 por cento); Streptococcus spp. (7,69 por cento); Escherichia coli (7,69 por cento) e Citrobacter freundii (11,5 por cento). A associação observada foi Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica (3,85 por cento). Os antimicrobianos com maior eficácia contra os agentes isolados Gram positivos foram penicilina/novobiocina (100 por cento), cefalotina (100 por cento) e florfenicol (100 por cento) e contra o Citrobacter freundii foram a ampicilina (100 por cento) e florfenicol (100 por cento). Já em relação a Escherichia coli, 66,7 por cento dos isolados mostraram-se resistentes à ampicilina, cefalotina, florfenicol e tetraciclina. A mastite está presente em ovelhas no estado do Pará, havendo a necessidade de estimar, em estudos futuros, as perdas econômicas causadas por essa enfermidade. O CMT apresentou resultados satisfatórios, podendo ser recomendado como teste de triagem para o diagnóstico de casos individuais de mastite subclínica em ovinos, uma vez que apresentou boa relação com o exame microbiológico. No antibiograma foi observado que a maioria dos agentes isolados apresenta-se sensível aos diferentes antimicrobianos testados, sendo os antibióticos com melhor eficiência o florfenicol e a cefoxitina.

The objective of this paper was to study the etiology of mastitis in sheep at northeastern Pará, and to establish the sensitivity of isolated bacteria to antibiotics. A total of 176 Santa Inês nursing sheep kept in semi-intensive system from seven properties were examined. The mammary gland was clinically examined and the milk was submitted to the Caneca Telada Test, the California Mastitis Test (CMT), bacteriological examinations and antibiograms. Out of the 352 mammary halves (176 sheep), 5.9 percent (21/352) had clinical mastitis and by the CMT test, 7.39 percent (26/352) had subclinical mastitis and 86.64 percent (305/352) mammary halves did not have mastitis. Most of the animals with mastitis were in the second third of the lactation period, had less kids and more lactation periods. The following bacteria were isolated from the clinical mastitis Staphylococcus spp. coagulase negative (42,9 percent); Staphylococcus aureus (9.52 percent); Streptococcus spp. (4.76 percent) and Escherichia coli (4.76 percent). Were observed associations of Staphylococcus aureus and Streptococcus spp. (4,76 percent); Staphylococcus spp. coagulase negative nonhemolytic, Staphylococcus spp. coagulase negative hemolytic and Staphylococcus spp. coagulase negative non hemolytic pigment (4.76 percent). Already in subclinical mastitis the bacteria isolated were Staphylococcus spp. coagulase negative (26.9 percent); Staphylococcus aureus (15.,4 percent); Streptococcus spp. (7.69 percent); Escherichia coli (7.69 percent) and Citrobacter freundii (11.5 percent). Were observed associations of Staphylococcus spp. coagulase negative nonhemolytic and Staphylococcus spp. coagulase negative hemolytic (3.85 percent). The most efficient antibiotics for the Gram positive agents were penicile/novobiocine (100 percent), cefalotine (100 percent) and florfenicol (100 percent) and for the Citrobacter freundii were ampicilina (100 percent) and florfenicol (100 percent). In relation to Escherichia coli, 66.7 percent of isolates to ampicillin, cephalothin, florfenicol and tetracycline were resistant. Mastitis is present in sheep in the State of Pará, and it's necessary to estimate, in future studies, the economic losses caused by this disease. The CMT show satisfactory results and can be recommended as a screening test for diagnosing individual cases of subclinical mastitis in sheep, once had a good relationship with the microbiological examination. In the antibiogram where most of the isolated agents appear sensitive to different antibiotics tested, the antibiotics with the best efficiency were florfenicol and cefoxitin.

Phase Variation of Biofilm Formation in Staphylococcus aureus by IS 256 Insertion and Its Impact on the Capacity Adhering to Polyurethane Surface

While ica gene of Staphylococcus epidermidis is known to undergo phase variation by insertion of IS256, the phenomenon in Staphylococcus aureus has not been evaluated. Six biofilm-positive strains were tested for the presence of biofilm-nega-tive phase-variant strains by Congo red agar test. For potential phase-variant strains, pulsed-field gel electrophoresis was done to exclude the possibility of contamination. To investigate the mechanism of the biofilm-negative phase variation, PCR for each ica genes were done. Changes of ica genes detected by PCR were confirmed by southern hybridization, and their nucleotides were analyzed by DNA sequencing. Influence of ica genes and biofilm formation on capacity for adherence to biomedical material was evaluated by comparing the ability of adhering to polyurethane sur-face among a biofilm-negative phase-variant strain and its parent strain. A biofilm-negative phase-variant S. aureus strain was detected from 6 strains tested. icaC gene of the phase-variant strain was found to be inactivated by insertion of additional gene segment, IS256. The biofilm-negative phase-variant strain showed lower adher-ing capacity to polyurethane than its parent strain. This study shows that phase variation of ica gene occurs in S. aureus by insertion of IS256 also, and this biofilm-neg-ative phase variation reduces adhering capacity of the bacteria.

La fibronectina y la adherencia de microorganismos patógenos / Fibronectin and the adherence of pathogenic microorganisms

La fibronectina (Fn) es uno de los principales componentes de la superficie celular, las matrices extracelulares y el plasma. La constituyen un dímero con dos cadenas polipeptícas de 250 kDa. Su estructura primaria está formada con base en unidades de repetición, originando los dominios de unión a diversas moléculas. La integrina Ó ß participa como el principal receptor celular de Fn. La fibronictina participa en procesos inmunológicos de fagocitosis, inflamación y opsonización, favoreciendo la depuración de bacterias y retos celulares. Juega un papel relevante en la cicatrización durante la hemostásis. En la superficie celular puede unirse a diferentes microorganismos, favoreciendo su colonización, siendo la primera etapa en la epatogénesis de diversas enfermedades infecciosas. En Staphylococcus aureus la proteína FnBp une al fragmento de 29 kDa de amino terminal de la Fn, sitio comparativo por Streptococcus pyogenes donde la proteína Sfb parece ser el ligando de la bacteria y no el ácido lipoteicóico (ALT). La Fn favorece la adherencia de bacterias gram positivas, su ausencia en la otofaringe favorece la colonización de bacterias gram negativas. Especies bacterianas de la cavidad orofaringea provocan la proteólisis de Fn y pueden participar indirectamente en la regulación de la flora cuando afectan los niveles de Fn en las superficies celulares. Treponema pallidum se une al sitio de reconocimiento celular de la Fn mediante una proteína semejante a la integrina (B 1) Entamoeba histolytica y schistosoma provocan una degradación de la Fn para poder invadir los tejidos epiteliales. Los parásitos intracelulares como Leishmania y Trypanosoma cruzi se adhieren a la Fn, utilizándola para facilitar su entrada a las células que infectan. La Fn puede unir virus y partículas virales favoreciendo la acción depuradora en este tipo de infecciones. Su amplia distribución en el organismo y su multifunsionalidad la hacen ser una proteína determinante en los procesos homeostásicos y de gran interés como un determinante en colonización e infección